COVID-19 (COrona VIrus Disease-2019) Тема - 2

КД:
В момента се използва PCR тест, при който многократно се размножава генетичен материал от вируса и се оцветява. Този тест е много чувствителен, сравнително бърз  и високо специфичен. Това означава, че тестът не засича генетичен материал от други корона вируси.
Тестът засича наличието на вируса в тялото, но не показва имунната реакция. Ако се направи прекалено късно, тестът може да е отрицателен.
В първата седмица след появяването на симптомите вирусът се намира в гърлото и този тест е много надеждно положителен.
Във втората седмица е възможно вирусът да слезе в белия дроб и наличието му в гърлото да не е толкова голямо, съответно тестът не е толкова надеждно положителен.
Знаем, че дори пациенти с много малко симптоми, които почти не забелязват разболяването си, показват наличие на вируса в доста количество в  белия дроб за 2-3 седмици. През това време можем да открием вируса с PCR тест на храчка. Недостатък в тези случаи е, че много от тези хора не могат да изкашлят храчка от дълбоко. Затова най-често се взема дълбок гърлен секрет.
Другото, което може да се направи в тези случаи, но не е установена практика, е да се изследва фецес. Там вирусът се засича дълго време, почти толкова дълго, колкото в белия дроб., т.е. може да се използва за диагностика. Засега смятаме, че от фецес вирусът не е инфекциозен, тъй като когато го поставим от там в клетъчни култури не расте.

-Как се взима правилно гърления секрет за PCR тест?
КД:
Много е важно да се бръкне дълбоко до задната фарингиална стена, орофаринкса.
Има два начина.
Единият е през носа, но е много болезнено. Бърка се през основата на носа, докато клечката се спре в задната носна стена.
Вторият начин е през устата. Секретът се взема НЕ от мекото небце, където виси увулата, а зад нея. Тампонът трябва да се завърти хубаво, за да обере горната част на лигавицата, тъй като там се задържат най-много вируси.
-Това значи ли, че ако не е взет правилно, тестът може да е фалшиво отрицателен?
КД:
Относително невероятно е, защото се вземат по две проби на всеки пациент ( две клечки).

-Колко се тества и смятате ли за възможно да се тестват цели извадки от населението?ю
КД:
Има недоволство и изказвания в общественото пространство, че не се тества, че се чака дълго за тест, че никой не вдига на горещите линии. Хората са нервирани, но всъщност в повечето случаи тестовете излизат бързо. Най-късно на следващия ден имаме резултат. В някои случаи логистиката е претоварена, тестовете се транспортират до дадена лаборатория и това отнема време.
Имаме много висок капацитет за тестване.  Мерките на изолация и много тестване дават резултат.
Това, което не правим в момента, е тестване на части от населението с PCR. Например Не правим тестове на 1000 човека, които нямат причина да бъдат тествани, тъй като имаме много хора, които имат причини за тестване и капацитетът ни е запълнен с тях.
На един по-късен етап обаче ще тестваме извадки от населението за антитела. Организмът започва да изгражда антитела около 10 дена след инфектирането. В началото нивото им е ниско, но след 2 или 3 седмици се покачва. С ЕЛИЗА тест антителата могат да се измерят независимост дали пациентът е прекарал болестта безсимптомно или  тежко. Така ще се разбере какъв процент са изкарали болестта безсимптомно. Това ще бъде третата важна стъпка в епидемиологичното моделиране. (Първите две са изолация и тестване с PCR)
Тези тестове обаче едва наскоро бяха разработени. Има много малко фирми, които произвеждат тези тестове и могат да ги доставят в големи количества. Това означава, че има предварителен процес на подготовка на лабораториите, за да може тестът да се прави в достатъчно големи количества на ден.
Има и друг вариант тези тестове да се правят в лаборатория в малки количества. Това, което ние правим отдавна, е имунофлуоресцентен тест, който е много трудоемък. Инфектираме колонии клетки с вируса и преди тези клетки да умрат, спираме инфекцията. Клетките  са пълни с вирусен протеин-нуклеокапсиден протеин.Това е строителен протеин на вируса и основният антиген при тези тестове.Той се слага върху стъкълца, изсушава се и после се накапва със серум от пациент. Ако в серума има антитела, те залепват към антигена. Добавя се друго вещество към тях, което свети, ако засече човешки антитела. Това е много трудоемък процес. Всеки тест трябва да се наблюдава от лаборант, който преценява дали тестът е положителен или отрицателен. Това не е подходящо за мащабно тестуване.

При ЕЛИЗА тестуването  всичко е автоматизирано с машина, но тези тестове тъкмо сега се разработват.Нужно е да бъдат валидирани. Работим с един производител, на когото помогнахме да направи оценка на ефикасността на теста.В други страни има други производители, които в момента също разработват такива тестове.

-ЕЛИЗА тестовете са известни от тестването на алергии?
КД:
Да, така е.
Имаме три аспекта при изследването на антитела- титър, активност на антителата и мястото на свързване на антителата към вирусния протеин.
Титърът на антителата е мярка за количеството. В последователни разреждания на серум от пациента гледаме до кое разреждане все още има антитела.
Активността е т.нар. avidity maturation. (узряване на антителата за свързване с протеина на вируса. колко жадно/активно се свързват с него).
Този Авидитет се увеличава с времето. В началото антителата са ниско активни, след 2-3 седмици стават високо активни. Това е процес на оптимизация от страна на тялото ни. Започват да се произвеждат тези антитела, които са най-жадни за протеина на вируса.
Антителата, освен че могат да се свързват с определен протеин, могат да се свързват и с определено място върху този вирус.
Когато вирусът влезе в организма, той трябва да се свърже с определено място-рецептор в клетките ни. Иначе вирусът е там, но не е свързан и не може да влезе в клетката и един вид не може да ни разболее.
Има малко на брой антитела, които се свързват с точно определеното място върху вируса, с което той иска да се свърже с рецепторите на нашите клетки. Така те блокират кукичката на вируса към нашите рецептори и са особено ефективни.  Наричат се неутрализиращи антитела-неутрализират инфекцията. За да ги разграничим от другите, правим друг вид тест, наречен неутрализационен тест. Той функционира по следния начин. Вземаме вирус и го слагаме в клетъчни култури в една реакция. На друго място вземаме клетъчни култури, към които преди това добавяме серум от пациент, и след това добавяме вируса. Ако в серума от пациента има неутрализиращи антитела, ще видим, че тези клетки няма да се инфектират и  да умрат за разлика от първата контролна група клетки. След това можем да направим титър на тези антитела- започваме да разреждаме серума от пациента и виждаме при какво разреждане все още неутрализиращите антитела работят. Пациент може да има висок неутрализационен титър и нисък общ титър на антителата- тоест може да има много такива високо ефективни антитела, но малък брой общи антитела. Такъв пациент е в изгодна позиция. Може да съществува и обратният вариант. Пациент с висок титър общи антитела и нисък титър неутрализиращи антитела. Защо е така, не знаем. Има големи разлики между пациентите.

-Какво означава това за тестването, за медицинския персонал, когато се тества с автоматизирани ЕЛИЗА тестове?
КД:
ЕЛИЗА тестовете са практични, ако мислим за голям мащаб при естествените инфекции и искаме да видим дали хората са прекарали инфекцията. Там е все едно какъв е титърът, а искаме само да знаем дали пациентът е прекарал вируса-да или не. Защо е така? Защото при естественото заразяване (не в лабораторни условия) антителата не са тези, които убиват вируса.По-важен е клетъчния отговор, a а той е трудно да се тества. Затова мерим антителата, защото е лесно да бъдат измерени.
Има случаи, в които трябва да се изследва много по-точно. Например при разработването на ваксини. Там трябва да се види дали чрез ваксината се изработват повече неутрализиращи антитела.
При пасивното имунизиране чрез плазма от оздравели пациенти също се гледа дали плазмата неутрализира вируса.
-Казахте, че до 2-3месеца е възможно да имаме такъв бърз ЕЛИЗА тест за антитела. Може ли да ида в аптеката и да си купя такъв тест и да се самоизследвам? За кого ще са предназначени тези тестове?

КД:
Имаме вече един автомат в института и ще се сдобием с още един в лабораторията. В другите лаборатории също ще се доставят. Тестовете могат да бъдат изпращани към лабораториите от личните лекари. При тези тестове не е толкова важно резултатът да излезе бързо, тъй като тестваме дали някой е прекарал заболяването и няма значение дали резултатът ще излезе след  ден или два, или три. Такива тестове ще  са необходими не само заради желанието да посетим баба си, но най-вече за хората, работещи на първа линия,
Има тестове за антитела в момента, които човек може сам да си купи в ибей, Те не са валидирани. Идват от Азия и все още трябва да се ползват с внимание. Използват друг принцип на тестване. Проучваме няколко и до няколко седмици ще излезем с публикации колко са надеждни такива бързи тестове за антитела.